Анализ на птичий грипп

Анализ на птичий грипп thumbnail

Какие анализы нужны, чтобы определить, что у человека птичий грипп? Могут ли обычные гриппозные вакцины защитить от птичьего гриппа? Есть ли лекарства от птичьего гриппа?

Как определить, что у человека птичий грипп?

Как определить, что у человека птичий грипп?

По теме: «Житель Раменского слег в больницу из-за птичьего гриппа».

«У диких пернатых в Калмыкии нашли птичий грипп».

Человек может заразиться птичьим гриппом в случае употребления в пищу мяса и яиц больных птиц без достаточной термической обработки. Опасны выделения зараженных птиц, которые, попадая на растения, в воздух, в воду, затем могут заразить человека через воду при питье и купании, а так же воздушно-капельным, воздушно-пылевым путем, и через грязные руки. Следует помнить, что при минусовых температурах вирус птичьего гриппа сохраняется, но нагревание до температуры +70°С убивает вирус за несколько минут. Для обеззараживания предметов можно использовать ошпаривание.

Как можно определить, что у человека птичий грипп?

В районах, где регистрируется заболеваемость птиц гриппом A(H5N1), люди с клиникой респираторных заболеваний, бронхитами и пневмонией, повышением температуры неясного происхождения, а также страдающие диареей должны быть обследованы для исключения диагноза птичий грипп. От заражения до первых признаков заболевания может пройти около недели. Обычно заболевание птичьим гриппом начинается остро с озноба, повышения температуры до 38°С и выше, мышечных и головных болей, болей в горле. Возможен водянистый жидкий стул, многократная рвота. Состояние быстро ухудшается. Через 2-3 дня появляется влажный кашель, часто с примесью крови, одышка. Выслушивается жесткое дыхание и хрипы. Затем может возникнуть затруднение дыхания, вызванное отеком легких.

Как определить, что у человека птичий грипп?

Как определить, что у человека птичий грипп?

Кроме того, отмечают поражение печени, что выявляется по повышению активности трансаминаз. Поражаются почки; у трети больных развивается почечная недостаточность. Возможен отек мозга, острый панэнцефалит, токсический шок, коллапс.

Какие анализы нужны, чтобы определить, что у человека птичий грипп?

Для диагностики гриппа A(H5N1) необходимо взять кровь и мазок из носа. Выявление вируса с помощью метода иммуноферментной детекции, иммунофлуоресцентного метода или полимеразной реакции может быть выполнено за 24 часа. Во всех регионах России центральные инфекционные больницы применяют эти методы.

Могут ли обычные гриппозные вакцины защитить от птичьего гриппа?

Профилактика птичьего гриппа, кроме карантинных мероприятий, должна быть направлена на усиление иммунитета. ВОЗ рекомендует активнее применять сезонные трехкомпонентные гриппозные вакцины в тех странах, где регистрируются вспышки гриппа A(H5N1) у домашней птицы. Это снизит вероятность появления новых штаммов, которые могут возникнуть, если в одном организме встретятся человеческий и птичий подтип вируса гриппа. Разработка вакцины от птичьего гриппа активно ведется во всем мире и в России.

Есть ли лекарства от птичьего гриппа?

В тех странах, где уже были больные люди, для лечения птичьего гриппа использовали препараты — ингибиторы вирусной нейраминидазы: Озельтамивир (Тамифлю) и Занамивир (Реленза). Эти препараты эффективны только в первые два дня после начала заболевания. К противовирусным препаратам широкого спектра действия относятся «Арбидол», «Ремантадин», «Альгирем». Эффективно использование высокотитражного интерферона («Гриппферон») и его индукторов («Циклоферон», «Амиксин»). Противопоказаны для лечения птичьего гриппа препараты, содержащие салициловую кислоту.

По материалам ГУ НИИ Гриппа РАМН.

Источник

Поставить
диагноз на грипп птиц можно путём
выделения вируса и идентификации его
в РСК, РН и РТГА, а также выявления
специфических AT
в процессе эпизоотии или по прошествии
её (ретроспективная диагностика). В
нашей стране биопромышленность выпус­кает
2 диагностических набора:

а) набор специфических
АГ и сывороток к ним для диагно­стики
гриппа птиц 13-и серотипов;

б)
диагностический набор для идентификации
вируса НБ и Ш (актуального эпизоотического
типа).

Выделение
вируса.
Взятие
и
подготовка
материала.
В
качестве вируссодержащего материала
используют се­лезёнку, головной мозг,
синусы, трахею, лёгкие, воздухоносные
мешки, кишечник от боль­ной птицы или
свежих трупов. Материал в лабораторию
доставляют в замороженном виде в термосе
со льдом. Инфекционные титры вируса в
назальных смывах бывают максимальны­ми
через 2-4 дня после заражения птицы и
достигают 105-107
ЭИДзо/мл смыва. Изолировать вирусы из
клоачных смывов удаётся чаще всего на
5-8-й день после экспериментально­го
заражения птицы.

Заражение
куриных эмбрионов
.
Испытуемую
суспензию инокулируют 9-10-дн КЭ (не менее
5 на одну пробу) в аллантоисную или
амниотическую (лучше) полости общепринятым
методом и инкубируют в течение 72 ч.
Экстраэмбриональную жидкость каждого
эмбриона раздельно проверяют на
ГА-активность капельной РГА с 1 %-ной
взвесью эритроцитов кур. При отсутствии
положительной РГА проводят еще 3-5 слепых
пассажей, используя для за­ражения
КЭ эмбриональную жидкость предыдущего
пассажа. Если титры ГА низкие, про­водят
таким же образом еще 2-3 дополнительных
пассажа. Проба испытуемого материала
считается отрицательной, если в 3-5 слепых
пассажах не будет обнаружено ГА и
патогенно­го действия вируса (гибели
КЭ). При положительной РГА проводят
идентификацию выде­ленного вируса.

Читайте также:  Информация для родителей против гриппа

Заражение
культуры клеток
.
Вирус
после 2-5 пассажей хорошо развивается в
культуре фибробластов КЭ. ЦПД обыч­но
проявляется через 24-48 ч (в зависимости
от дозы и адаптации). Присутствие его
уста­навливают при помощи РГА и РГАд.
Предложен ускоренный метод титрования
инфекционности вируса гриппа в культуре
клеток путем подсчета гемадсорбирующих
клеток. Метод позволяет получить
результат через 8 ч после заражения.

Биопроба
на цыплятах
.
Испытуемую
суспензию инокулируют цыплятам
2-3-месячного возраста. Летальную инфекцию
у цыплят можно вызвать при любом методе
заражения (подкожно, внутримышечно, в
мозг, конъюнктиву) подтипами А1, А7 и А5.
Заражение per
os
с кормом и водой удается непостоянно,
лишь в случае высокой патогенности
эпизоотиче­ского изолята гриппа.
Зараженные цыплята, как правило, гибнут
через 36-72 ч в зависимо­сти от дозы и
вирулентности возбудителя.

Индикация
и идентификация вируса
.
Для
этой цели широко используют методы ИФ,
цитоскопию, биопробу (на птице и КЭ) и
серологическую идентификацию. С помощью
монАТ можно идентифицировать не только
разные группы вирусов (ВГП и ПМВ), но и
опре­делять подтипы ВГП и серотипы
ПМВ птиц, и даже штаммы внутри одного
подтипа, а так­же локализацию компонентов
вириона в зараженных клетках (МРВГП —
МА клонов 1С6, 5С10, N:2
— МА клоны 303 и т.д.). На основе монАТ можно
готовить диагностические пре­параты
для выявления АГ и AT
в РТГА, НИФ, РСК, ИФА и др. реакциях.

РГА.
Для
индикации вируса в патологическом
материале можно использовать РГА.
Надосадочную жидкость после
центрифугирования суспензии проб из
органов и тканей боль­ной птицы, а
также смывов исследуют в капельной или
пробирочной РГА с 1%-ной суспен­зией
эритроцитов кур или 0,5%-ной взвесью
эритроцитов морской свинки. Реакцию
учиты­вают через 20 мин и 1 ч. Специфичность
определяют в РТГА.

Цитоскопия.
Метод
заключается в исследовании тканевых
элементов в отпечатках, по­лученных
со слизистой оболочки верхних дыхательных
путей (лучше) и органов. Препараты
высушивают и окрашивают одним из методов:
по Романовскому, Пигаревскому, Быковско­му
и т. п. При окраске по Быковскому и
Пигаревскому в цитоплазме клеток при
гриппе обычно обнаруживают тельца-включения
ярко-красного цвета; при окраске по
Романовско­му — фиолетового цвета.
Внутриклеточные включения находят не
только в клетках цилинд­рического
эпителия, но и в цитоплазме макрофагов,
лейкоцитов и плоского эпителия. В
на­стоящее время этот принцип
исследования используется с применением
люминесцентной микроскопии.

Метод
простого флюорохромирования
.
На
мазки-отпечатки из органов и смывов
на­носят 1-2 капли рабочего раствора
акридина оранжевого (1:10000), покрывают
покровным стеклом и свежий препарат (в
течение 10 мин после приготовления)
рассматривают в лю­минесцентном
микроскопе. Ядра клеток выявляются по
изумрудно-зеленому свечению, РНК плазмы
клеток — в виде не резко ограниченных
гранул красного или оранжевого цвета.
В препарате, имеющем вирус гриппа,
выявляются включения в виде четко
отграниченных яр­ко-красных гранул
в цитоплазме клеток.

Серологическая
идентификация

Для
идентификации гриппа млекопитающих и
птиц наиболее простым и высоко досто­верным
методом является РТГА. РН — штаммоспецифическая
и также высоко достоверная, но используется
в диагностике значительно реже. Ее
обычно применяют при некоторых не­ясных
и спорных случаях.

Реакция
связывания комплемента.

Используют
для определения типоспецифичности
выделенного вируса, когда в РТГА не
удается установить родственных связей
между выделенным и эталонными штам­мами
вируса гриппа по антисывороткам к ним.
В этом случае в РСК с эталонными иммун­ными
сыворотками против вирусов гриппа типов
А, В и С устанавливают типовую
принад­лежность штамма.

В
последнее время для типирования
нейраминидазы вируса начали применять
РТНА, но в диагностической ветеринарной
практике она пока еще не применяется.
Ее используют, в основном, для изучения
АГ связей различных штаммов вируса
гриппа.

Реакция
торможения гемагглютинации
.
Идентификацию
испытуемого вируса проводят с набором
эталонных штаммоспецифических гриппозных
сывороток к его АГ вариантам. Для
дифференциации в реакцию вводят сыворотку
против вируса НБ. РТГА ставят микро- или
макрометодом по общеприня­той методике.

Иммуноферментный
метод
.
Может
быть использована как экспресс-метод
диагностики гриппа птиц. Препара­ты
готовят непосредственно ex
tempore
от убитой больной или свежепавшей птицы.
Прямой метод ИФ позволяет определять
АГ ВГП в мазках-отпечатках тканей птиц,
идентифициро­вать АГ данного вируса
из различных тканей организма,
инкубационных яиц, печени зара­женных
эмбрионов и культур клеток фибробластов;
выявить вирусный АГ даже в тех случа­ях,
когда вирус из пораженных тканей выделить
не удается.

Читайте также:  Понос после гриппа у ребенка

В
ветеринарной диагностической практике
для идентификации выделенного вируса
РДП не используют, так как необходимы
концентрированные и очищенные АГ. В
основном при­меняют ее для изучения
АГ структуры вирусов гриппа. Разработаны
наборы для ИФА с монАТ, непосредственно
обнаруживающие ГА, нуклеокапсидный или
матриксный белки виру­са гриппа.
Идентификацию вирусспецифической
нуклеиновой последовательности
предла­гается осуществлять ПЦР с 2-мя
типами праймеров (на основе генов
неструктурного белка и ГА). Тест
стандартизован для определения AT
к ВГП в сыворотке крови у индеек.

Минимальные
АГ различия между вариантами и родительским
вирусом выявлялись только монАТ,
продуцируемыми клетками гибридомы
PEG-1
или фрагментами селезенки гипериммунных
животных. МонАТ дают возможность точно
проследить филогенетические взаимоотношения
между вирусными штаммами в составе
субтипа, а в сочетании с методами
пептидного картирования и определения
последовательности а.к. — выяснить
молекулярную структуру АГ участка ГА.

Серодиагностика
и ретроспективная диагностика
.
Обнаружение
анти-ГА, ВНА и КСА — надежный признак
протекающей или уже прошедшей инфекции
ГП в стаде.

РТГА.
Исследование
парных сывороток проводят с диагностической
целью при ати­пичном, часто вялом
течении болезни с поражением органов
дыхания. Сыворотку от диких птиц на
присутствие противогриппозных AT
исследуют при изучении роли перелетных
птиц в распространении гриппа. Обязательным
условием для ретроспективной диагностики
ГП является одновременное исследование
парных сывороток, так как для диагностических
це­лей имеет значение сравнительный
титр AT
против вирусов различных серологических
под­типов в 1-й и 2-й пробах сыворотки.
Первую пробу сыворотки хранят при 4°С
или в замо­роженном виде. Обе пробы
исследуют одновременно. Перед постановкой
реакций сыворот­ки прогревают при
60°С 30 мин, а затем освобождают от
термостабильных ингибиторов, используя
СО2,
КО4
и др. методы. Если титр AT
во 2-й пробе сыворотки (через 10-14 дн после
заболевания) превышает не менее чем в
4 раза титр AT
к тому же типу вируса в 1-й пробе, то РТГА
считается положительной, подтверждающей
диагноз гриппа птиц. При по­становке
РТГА с парными сыворотками больных птиц
необходимо использовать не только набор
эталонных штаммов (например, к вирусам
A/Fowl
plague,
A/Chick/Scotland,
A/Turkey,
A/Duck),
но и местные штаммы того птицехозяйства,
где зарегистрирована болезнь. При
анализе результатов РТГА необходимо
указывать, сколько сывороток было с
низким, сред­ним и высоким титром к
тому или иному штамму вируса гриппа. В
ряде случаев вместо ин­дивидуальных
сывороток показатели иммунитета стада
(после переболевания или прививки живой
вакциной) можно изучить на
сыворотках,.полученных от нескольких
птиц. В этих случаях испытуемые сыворотки,
взятые от отдельных птиц, нужно соединять
в равных объ­емах. На протяжении опыта
(120 дн после реконвалесценции) в сыворотках
кур находили анти-ГА: до 75-го дня титры
сохранялись примерно на одном уровне
(5-5,8 log2),
а в даль­нейшем снижались (до 4,4-4,6
log2).

РСК
применяют для обнаружения АГ и AT
в целях ранней и ретроспективной
диагно­стики гриппа. Ставят с
аллантоисными жидкостями КЭ или с
очищенными диагностикумами. РДП широкого
применения не нашла, так как необходимы
высокие концентрации чис­тых АГ. Среди
исследователей нет единого мнения о
чувствительности этой реакции. Неко­торые
авторы указывают, что чувствительность
РДП сравнительно невысока, поскольку
достоверные положительные результаты
получали лишь при исследовании сывороток
с тит­ром AT
в РТГА 1:80 и выше.

Реакция
радиального гемолиза
.
В настоящее время используется для
сероэпидемио­логических исследований
и при оценке эффективности противогриппозных
вакцин. РРГ с ВГ А обладает выраженной
штаммовой специфичностью: диаметр зон
гемолиза с гомоло­гичными АГ при
исследовании сывороток хорьков,
зараженных 6-ю различными вирусами, были
в 1,5-3 раза больше, чем с гетерологичными.
При правильном подборе штамма РРГ может
быть с успехом использована для
определения анти-ГА.

Показано
хорошее совпадение результатов титрования
AT
в ELISA,
РСК и ИФ. Однако в ELISA
значительно выше (титр 1:481-1:1520), чем в
РСК и РИФ. Сенсибилизацию лунок панелей
проводят РНК-АГ вируса гриппа А. Предложен
новый метод приготовления AT
эритроцитарных диагностикумов к вирусам
гриппа, которые с успехом могут быть
изготов­лены на основе любых штаммов
вируса гриппа. Они позволяют определять
типовую при­надлежность эпизоотических
и межэпизоотических штаммов ВГП, свиней
и лошадей. В практической работе врачу
ветеринарной лаборатории, возможно,
придется встретиться не только с гриппом
кур и уток, но и с гриппом индеек.

Читайте также:  Эхинацея при лечении гриппа

Таблица
107 — Лабораторные методы дифференциации
гриппа и
ньюкаслской
болези птиц

Анализ на птичий грипп

Умея
диагностировать грипп кур и уток, имея
набор диагностикумов, врач лаборатории
при необходимости сможет поставить
диагноз при гриппозной инфекции индеек.

При
респираторных вирусных болезнях КРС,
свиней и птиц (грипп, парагрипп,
РС-инфекция) разработан направленный
тест. Это новый иммуноферментный
мембранный тест быстрого обнаружения
вирусов гриппа в носоглоточных смывах.
Чувствительность направ­ленного
метода Flu-А
составляла 90%. С помощью этого теста
более легко обнаруживается
клеточно-ассоциированный АГ, присутствующий
в клинических пробах, чем свободный
ви­рус. С помощью Flu-А
теста удалось обнаружить вирусы гриппа
А птиц (субтипы ГА Н3 и Н6) и свиней (H1N1)
в клоачных смывах и гомогенатах.

Дифференциальная
диагностика
.
КЧП
(H7N1)
и другие формы гриппа птиц следует
отличать от НБ, ИБ, ИЛТ, гемофилеза и
респираторного микоплазмоза. Для
идентификации вирусов НБ и КЧП используется
диагностический набор.

В
сомнительных случаях для дифференциального
диагноза ставят РН на КЭ и заражают
птиц, иммунных к вирусу НБ.

Лабораторная
диагностика гриппа свиней

Грипп
свиней (инфлюэнца свиней, энзоотическая
бронхопневмония) — высоко контаги­озная,
остро протекающая болезнь, возникающая
в холодное время года и характеризую­щаяся
внезапным началом, резко выраженной
лихорадкой, общей слабостью и поражением
органов дыхания. Вирус гриппа свиней
(ВГС) может вызвать заболевание людей
и, наобо­рот, установлена возможность
заражения свиней вирусом гриппа человека.

Болезнь
впервые диагностирована в США в 1918 г.
во время пандемии гриппа людей. Встречается
во многих странах Европы и Америки,
зарегистрирована и в бывшем СССР В
отдельных хозяйствах причиняет большой
экономический ущерб. Описана вспышка
гриппа среди 115 свиноматок, вызванная
«новым типом» вируса гриппа H3N2,
который появился в Дании в 1990 г. Степень
опоросов сократилась с 90 до 43% — через
14 дн после появления заболевания.
Снизилось количество новорожденных
поросят.

Выделение вируса.
Выделение вируса
на лабораторных животных
.
Используют
хорьков, белых крыс, но чаще белых мышей.
В качестве исходного материала для
выделения вируса используют ку­сочки
лёгкого, трахеи, бронхиальный экссудат,
носовые смывы от больных свиней.

Мышей
заражают интразально под эфирным
наркозом и в течение 5-
7 дн наблюдают
за ними, обращая внимание на общее
состояние животных. Если животные не
гибнут, их уби­вают. На вскрытии
отмечают изменения в лёгких. Затем
проводят ещё 3-4 пассажа. По мере адаптации
вирулентность вируса для белых мышей
значительно возрастает, они гибнут на
4-7-й, а иногда на 14-й день после заражения.

Выделение
вируса на КЭ
.
Испытуемый
материал инокулируют в аллантоисную
или амниотическую полости 9-12-сут КЭ,
которые после заражения инкубируют
48-72 ч, иногда до 96 ч при температуре 37°С.
Для выделения вируса обычно проводят
2-3 слепых пассажа.

Выделение
вируса в культуре
клеток.
Культура клеток почек поросёнка —
универ­сальная биологическая система,
применяя которую можно выделить вирус
от больных сви­ней. Для быстрой
индикации вируса гриппа в 1-слойных
культурах почечного эпителия по­росят
используют РГАД с эритроцитами курицы,
морской свинки или 0-группы человека.
ГАд, положительная РГА, а также
дегенеративные изменения клеток
указывают на присут­ствие вируса в
исследуемом материале. Вирус, вызвавший
явление ГАд, должен адаптиро­ваться
к КЭ и вызывать накопление ГА.

Риноцитоскопия.
Со
слизистой оболочки носа делают
мазки-отпечатки. Положитель­ный
диагноз ставят на основании обнаружения
в отпечатке в первые 1-3 дн болезни
большо­го количества клеток
цилиндрического эпителия. Позднее
содержание цилиндрических кле­ток в
мазке уменьшается. Вопрос о диагностическом
значении цитоплазматических включе­ний
при гриппе свиней неясен; в литературе
нет достаточно обоснованных сообщений.

Обнаружение
вируса в РГА.
При
постановке РГА обычно используют
эритроциты кур или морской свинки. Берут
0,5 мл носового смыва, добавляют 0,5 мл
0,5%-ной взвеси эрит­роцитов, тщательно
встряхивают и оставляют при комнатной
температуре на 1-2 ч. Резуль­таты реакции
учитывают общепринятым методом.
Чувствительность реакции можно повы­сить,
увеличив объем испытуемых смывов. РГА
со смывами используют только при
массо­вом заболевании гриппом, так
как процент специфических реакций не
превышает 30.

Соседние файлы в предмете [НЕСОРТИРОВАННОЕ]

  • #
  • #
  • #
  • #
  • #
  • #
  • #
  • #
  • #
  • #
  • #

Источник