Лабораторная диагностика гриппа и ОРВИ
Известно более 200 разновидностей вирусов, избирательно поражающих респираторный тракт человека (возбудителей ОРВИ).
У большинства возбудителей ОРВИ первичное размножение вирусов происходит в слизистой оболочке дыхательной системы, поэтому клиническая картина сходная, заболевание протекает в виде ринита, ринофарингита, как правило, в легкой форме. У детей раннего возраста вирусы могут поражать нижние отделы респираторного тракта, и болезнь протекает в более тяжелой форме в виде бронхитов, бронхиолитов, пневмоний. Наиболее тяжело протекающей острой вирусной респираторной инфекцией является грипп, который часто принимает эпидемическое распространение, характеризуется явлениями общей интоксикации, лихорадкой, поражением дыхательного тракта, нервной и сердечно-сосудистой систем. Максимальное число тяжелых форм течения инфекции наблюдается в период пандемий, обусловленных новым вариантом вируса гриппа.
Лабораторная диагностика — ранняя и ретроспективная — проводится для подтверждения клинического диагноза, дифференциации гриппа от ОРВИ другой этиологии и для эпидемиологических целей. Вирусологическая лаборатория ФГУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии в Курской области», входящая в состав опорной базы Федерального центра по гриппу и острым респираторным вирусным инфекциям, проводит исследования с целью этиологической расшифровки заболеваемости гриппом и ОРВИ, в том числе в организованных коллективах детей и взрослых, проведение лабораторных исследований в целях расшифровки региональной структуры заболеваемости гриппом и ОРВИ. Лаборатория оснащена современным оборудованием, имеет необходимые диагностические препараты, укомплектована высококвалифицированными специалистами.
Лаборатория оуществляет диагностику с помощью экспресс-методов, вирусологических и серологических методов исследования. Быстрая (экспресс) диагностика гриппа и ОРВИ:
1)метод флюоресцирующих антител (МФА) — основан на выявлении вирусных антигенов в клетках эпителия носовых ходов, конъюнктивы (при явлениях конъюнктивита). Исследуемый материал: мазки из носа, конъюнктивы, взятые в первые 3 дня и не позднее 5 дня болезни. Определяемые возбудители: — вирусы сезонного гриппа типа А (h2N1) — вирусы сезонного гриппа типа А (H3N2) — вирусы гриппа типа В — вирусы парагриппа 1, 2, 3 типов — аденовирусы — респираторно-синцитиальный вирус;
2) метод полимеразной цепной реакции (ПЦР)- основан на обнаружении в клинических пробах генетического материала вирусов (РНК или ДНК)- является наиболее современным, высокочувствительным методом.
Исследуемый материал: мазки из носа и зева, взятые в первые 3 дня и не позднее 5 дня болезни, секционный материал. Определяемые возбудители:
— вирусы пандемического высокопатогенного гриппа типа А (h2N1)
— вирусы гриппа типа А
— вирусы гриппа типа В — вирусы парагриппа 1, 2, 3,4 типов
— аденовирусы — респираторно-синцитиальный вирус;
Вирусологическая диагностика — выделение вируса на чувствительной клеточной культуре с последующей идентификацией в реакции нейтрализации или ПЦР.
Этот метод отличается трудоемкостью и длительностью и используется, главным образом, для эпидемиологических и научных целей (изучается изменчивость вирусов, что помогает прогнозировать эпидемические подъемы гриппа, отбираются актуальные штаммы, пригодные для изготовления вакцин) Исследуемый материал: мазки из носа и зева (в первые 3 дня и не позднее 5 дня болезни).
Определяемые возбудители:
— вирусы гриппа типа А (разные серотипы)
— вирусы гриппа типа В Серологическая диагностика является ретроспективной. Она выявляет прирост титров антител к возбудителям заболевания в парных сыворотках крови, что позволяет установить точную этиологию даже при отрицательных результатах других методов лабораторной диагностики, а также при бессимптомном или атипичном течении гриппа, широко применяется и для эпидемиологических целей. Исследуемый материал: сыворотки крови, взятые в начале заболевания и через 10- 14 дней.
Возбудители к которым определяется прирост титров антител:
— вирусы сезонного гриппа типа А (h2N1)
— вирусы сезонного гриппа типа А (H3N2) — вирусы гриппа типа В
— вирусы парагриппа 1, 2, 3 типов
— аденовирусы
— респираторно-синцитиальный вирус;
В период подьема заболевамости гриппом и ОРВИ (в октябре- декабре 2009г.) вирусологической лабораторией обследовано методом флюоресцирующих антител (МФА) 432 человека. У 27% заболевших был выявлен аденовирус, у 8,3% — вирус парагриппа 3 типа, у 8% — респираторно-синцитиальный вирус, у 2% — вирусы парагриппа 1, 2 типов, у 0,2% — вирус сезонного гриппа типа А (h2N1).
При обследовании методом ПЦР 565 больных с подозрением на высокопатогенный грипп типа А (h2N1) РНК вируса обнаружена у 213 человек (в 38% проб). По даннным серологического обследования 67 больных ( в октябре и ноябре) заболевания гриппозной этиологии составили 4,3 % (грипп А(h2N1) сезонный — 2 человека), парагрипп 3 типа — 4,5% ( 3 человека), парагрипп 2 типа — 1,5% ( 1человек).
3.1.3490-17 » » (. 27 2017.)
3.1.3490-17
» «
(. 27 2017.)
I.
1.1. :
— ;
— ();
— .
1.2. , — , , — — .
II.
2.1. , .
2.2. , , , , .
2.3. , . , .
2.4. , , , , .
2.5. , — , .
2.6. , .
2.7. , :
— ;
— ;
— ;
— , ;
— ;
— .
2.8. , , (), , , , , . .
2.9. , — .
III.
3.1. . , , .
3.2. . 2 . , . , .
3.3. .
3.4. , , A (H5N1), , , . — , .
3.5. . , .
3.6. () , () , , . ( , ), (infection rate) 2 , , 50% . 50% , , 1:40, , , 1:80.
3.7. , ( ) 1:40 1:80, . , , 9%, , — 23%, , , 80%.
IV.
4.1. , ( : A/h2N1, A/H3N2, B/Yamagata B/Victoria, ).
4.2. . . , , , — , , .
4.3. ( , ). ( ). 6-7 ( ).
4.5. . , , . , .
4.6. , ( 1 ). , -, .
4.7. ( 2 ). .
4.8. ( 1-3 6 ) , , .
4.9. , . — , , , . (: A/H5N1, /H7N9), , , , .
V.
5.1. , , 150 . — -.
5.2. . , : 3-6 , 7-14 , 15-18 , 18-60 , 60 ( 30 ).
5.3. ( , , ).
5.4. :
— (, , , );
— (, , , );
— , (, , , ).
5.5. — 80% , , , .
5.6. ( 20% ) 2 .
VI.
6.1. .
6.2. , () 150 , , (-) . , (3-6 , 7-14 , 15-18 , 18-60 , 60 , 30 ).
6.3. :
— , (, ), , , ;
— () ( 3 ), (, ).
6.4. .
6.5. , 2 .
VII.
7.1. , (, ), .
7.2. — , , 100 39 , 30.09.2013 N714 » » 04.08.2016 N842 » «.
7.3. , , (1- — 7 , 2- — 3 ) . 1,0 .
VIII.
8.1. ( ) , .
8.1.1. .
8.1.2. , 150 (3-6 , 7-14 , 15-18 , 18-60 , 60 , 30 ) .
8.2. , ( , ), , , , (: , 5 , , — , , , , ).
8.3. :
— , ;
— ;
— — 1-1,5 , .
8.4. , — , .
8.5. , : , , , .
8.5.1. ( , , , , ). , (: , , , ).
8.5.2. : , , ( ). .
8.6. , , (-) .
8.7. ( 3 4 3.1.-17). 2,0 .
8.8. — :
— — (: (.N063/), (.N112/), (.N025/), );
— , ;
— 100 , 2 , ;
— , , , .
8.9. , , , ( ) . , .
IX.
9.1. .
9.1.1. ( ) . . , 6 , .
9.1.1.1. , , .
9.1.1.2. (-) 200 .
9.1.1.3. 50 , , . , 1:80 .
9.1.1.4. 21 () 28 () .
9.1.2. 4 .
9.1.3. , , , , , . .
9.2. , , , , . . ().
9.2.1. , — — .
9.2.2. 2 , — , ().
9.2.2.1. , . , , .
9.2.2.2. ( ), , ( ) .
9.2.3. , ( ) 5 .
X.
10.1. , , , , .
10.1.1. , , «». , , , , «».
10.1.2. , 1 () .
10.1.3. .
10.1.4. , . , 4 , . , , .
10.1.5. ( ), , .
10.2. 30 .
10.3. ( 2 ) : , , , , .
XI.
11.1. 17.09.1998 N157- (. 31.12.2014) » «.
11.2. — 3.1/3.2.3146-13 » «.
11.3. — 3.1.2.3117-13 » «.
11.4. . 3.3.2.1758-03 » «.
11.5. 31.03.2005 N373 » » ( » «, » «, » «, » «, » » ()», » «, » «).
11.6. 30.09.2013 N714 » «.
XII.
—
—
—
—
RDE — ,
—
— —
1
3.1.3490-17
,
1. ( )
, (), , , , , , , , , , , , , , , , .
. , . , 70% , . 1,0-1,5 ( ). 5% .
, 3 .
, , , .
, , 20-30 , .
— , 4-8C.
( ) 1000-1200./ 15-20 . () .
( ) (5+/-3)C 7 . -20C . . , » » .
2. ()
: , , . . (-). -20C .
( , ) (), , .
2
3.1.3490-17
()
1. , — RDE.
2. — — .
3. , .
4. .
, , . RDE, . II .
1. +37C . .
2. 40 .
3. 120 RDE .
4. .
5. +37C 18 20 .
6. +56C 30 .
7. 240 , pH = 7,2 . 1:10. .
8. +4C. , -20C .
1. 0 . , . +4C 1 .
2. .
3. (0,01 M , pH = 7,2). . +4C +4C .
4. 70% .
5. .
6. .
. 0,5% , , +4C . .
1. , 10 , 5 . 50 .
2. , , .
3. 1200 ./ 10 +4C.
4. , 10 . : .
5. ( 2-4) , . , +4C .
6. p .
7. : 2,5 247,5 500 ( ). .
8. 1:100. 100 9,9 15 . , .
9. 70% , . , .
10. 10 1:100 , . : .
11. 4 .
12. 16 . , 40 60 . <40, . >70, . 2 , , , , .
. 70% .
. , 0,5% . :
:
. , . , .
1. 0 .
2. (0,01 M , pH = 7,2). . +4C .
3. , RDE.
4. 96- V- .
5. .
6. .
7. .
( II !)
1. V- , D E. A E . A A D. E E H.
2. 25 B D ( B1-B10 D1-D10) , N1, F H ( F1-F10 h2-h20) , N2.
3. 50 A1-A10 E1-E10, . 22 .
4. , 25 . , A B, B C C D. 25 D. 25 E F, F G, G H. 25 H.
5. 25 , ; 1-10.
6. 50 12 . 11 .
7. , .
8. 50 0,5% , 11- .
9. .
10. 30 , .
11. 45 60. 12 «», , . , , , . «» .
12. 1:20 . — 1:10, — .
( II !)
1. 100 400 , RDE.
2. , , 30 +4C.
3. 30 +4C.
4. 600xg 5 .
5. , .
1. 0,5% 0 .
2. (0,01 M , pH = 7,2). +4C.
3. .
. -70C . . . .
4. 96- V- .
5. , .
1. V- , . .
2. 50 2 12 A B 2- 12- D E .
3. 50 H. .
4. 100 A1 B1. 100 D1 E1.
5. , 50 12- . 12 50 .
6. 50 0,5%- A, B, D, E H .
7. , .
8. + 4 30 .
9. , 45 60. H «» . , , , «» . , («»), .
10. , , 8 /50 . , HA, 160. 8, 20. , 20 , . . 1 19 .
11. , 8 50 , (), . 8. , !
12. .
. HA, 8 50 . , 4 25 . . 5 , 16 /50 2 . , 3 , 4 /50 . , . , 8 /50 . 1-2 8 /50 , .
()
1. 0,5% .
2. (0,01 M , pH = 7,2). +4C.
3. ( ).
4. , — (BPL-). -70.
5. , RDE, .
. -20 -70C.
6. 96- V- . 11 .
7. .
8. .
9. .
1. +37C. , .
2. . .
3. 25 B H ( B1-B11 h2-h21).
4. 50 (A1-A10).
5. 50 11 A11 .
6. , 25 A1-11 . 25 H .
7. 25 , 4 , , . , , 50 , 8 .
8. , .
9. 30 .
10. 50 12, .
11. 50 0,5% .
12. , .
13. + 4 30 .
14. 30 , 45 60C. 12 «» . , , , «» , 12- . , , .
/, . : «+» — («»), «+/-» — «-» — («»). , ( «»). . , . +4 0,5-1 , .
15. — , , 1:640. — , , , 640.
3
3.1.3490-17
()
1:10 1:5. 1:1280 1:1280. 2, . 2, , 2 , .
:
148 10 1:10; 20 — 1:10; 68 — 1:20; 40 — 1:40 10 — 1:80. 2, () :
. . = 1:22.
4
3.1.3490-17
, (COMMITTEE FOR PROPRIETARY MEDICINAL PRODUCTS (CPMP); https://www.ema.europa.eu/docs/en_GB/document_library/Scientific_guideline/2009/09/WC500003945.pdf).
, :
— — () ;
— — , , (<1:40) , ;
— — , , 21-28 .
, .
, , .
5
3.1.3490-17
:
: K = b / a,
— ,
b — .
: E = 100% (b — a) / b,
— ,
b — .
6
3.1.3490-17
1
2
,
3
:
* , .
** — 1:20 .
(Ӡ3.1.3490-17).
. , .
, . .
, — , .
Influenza virus A/B (вирусы гриппа А/В), РНК [реал-тайм ПЦР]
[09-120] Influenza virus A/B (вирусы гриппа А/В), РНК [реал-тайм ПЦР]
1190 руб.
Выявление вируса гриппа серотипов А и В (Influenza virus A/B), в ходе которого с помощью метода полимеразной цепной реакции в реальном времени (РТ-ПЦР) определяется генетический материал (РНК) вируса в образце биоматериала.
Синонимы русские
Грипп А/В.
Синонимы английские
Influenza serotypes A/B, RNA [real- polymerase chain reaction, RT-PCR, quantitative RT-PCR, qPCR, qRT-PCR].
Метод исследования
Полимеразная цепная реакция в режиме реального времени.
Какой биоматериал можно использовать для исследования?
Мазок из зева (ротоглотки) и носа, мокроту.
Как правильно подготовиться к исследованию?
- Рекомендуется употребить большой объем жидкости (воды) за 8-12 часов до сбора мокроты.
- Не принимать пищу, не пить и не полоскать горло в течение 2-3 часов до исследования.
- За 3-4 часа до взятия мазков из ротоглотки (зева) и носа не употреблять пищу, не пить, не чистить зубы, не полоскать рот/горло, не закапывать капли/спреи в нос, не жевать жевательную резинку, не курить. Взятие мазков оптимально выполнять утром, сразу после ночного сна.
Общая информация об исследовании
Influenza virus — это оболочечный вирус, характеризующийся наличием сегментированного негативного РНК-генома и нуклеокапсида в форме спирали. Он относится к семейству Orthomixoviridae. На основании структурных различий нуклеопротеида выделяют 3 серотипа Influenza: A, B и С. Серотип A встречается как людей, так и у животных, в то время как варианты B и C поражают преимущественно людей. Именно серотип А ответственен за подавляющее большинство случаев сезонных (эпидемических) и пандемических вспышек гриппа.
Идентификация вируса гриппа должна быть осуществлена в кратчайшие сроки, что связано с высокой заразностью этого заболевания. Кроме того, эффективность противовирусных препаратов максимальна при их назначении в первые 48 часов после инфицирования, что также диктует необходимость своевременной постановки окончательного диагноза. Среди многих «быстрых» диагностических тестов особое место занимает полимеразная цепная реакция в режиме реального времени (РТ-ПЦР). Полимеразная цепная реакция в реальном времени (РТ-ПЦР) — это метод молекулярной диагностики, позволяющий выявлять в биологическом материале (например, в мокроте) фрагменты генетического материала (РНК) возбудителя инфекции. Благодаря высокой чувствительности и специфичности метода, а также возможности получить результат в наболее короткие сроки, РТ-ПЦР заменила другие, применяемые ранее, методы диагностики гриппа: выделение вируса в культуре клеток, а также серологические исследования и иммуноферментный анализ.
Многие прямые лабораторные тесты, разработанные для идентификации Influenza, основаны на выявлении белковых компонентов наружной оболочки вируса: гемагглютинина (H) и нейраминидазы (N). Эти белки являются основными факторами, определяющими степень болезнетворности вируса, а также используются для диагностики и классификации выявляемого вируса гриппа. Они обладают выраженной изменчивостью (известно 16 разновидностей N и 9 разновидностей H серотипа Influenza A) (чем вызваны ежегодные сезонные вспышки гриппа), а также создает определенные трудности при идентификации вируса гриппа с помощью этих методов. Структурное разнообразие антигенов H и N приводит к тому, что чувствительность большинства прямых лабораторных тестов (таких как прямая иммунофлюоресценция и ELISA) составляет около 65-75 %. Исследование РТ-ПЦР основано на выявлении консервативной последовательности ДНК, общей для разных штаммов вируса гриппа серотипов А и В, что обуславливает максимальную чувствительность этого теста (98-100 %).
В отличие от других тестов, чувствительность исследования РТ-ПЦР практически не изменяется при взятии материала на фоне начатой терапии противовирусными препаратами. Это связано с тем, что в реакции выявляется не сам вирусный агент, а фрагмент вирусной ДНК. По этой же причине положительный результат исследования не всегда указывает на наличие живого вируса (репликацию) и не всегда означает, что пациент остается заразным для окружающих.
В отличие от других лабораторных тестов (в первую очередь, экспресс-тестов для определения антигена вируса гриппа), результат РТ-ПЦР в меньшей степени зависит от распространенности гриппа среди населения. РТ-ПЦР характеризуется редкими ложноположительными и ложноотрицательными результатами как во время эпидемии, так и в период низкой заболеваемости гриппом.
Идентификация вируса гриппа с помощью РТ-ПЦР возможна в течение более длительного времени от начала заболевания по сравнению с большинством других тестов. Тем не менее взятие отделяемого носо/ротоглотки для исследования с помощью РТ-ПЦР должно быть произведено не позднее чем через 72-96 часов (оптимально в первые 48-72 часа). Это связано с тем, что интенсивная репликация Influenza при поражении верхних дыхательных путей происходит в течение первых 4 суток заболевания. У пациентов с вовлечением нижних отделов дыхательных путей вирусная нагрузка сохраняется высокой более длительный период. Исследование отделяемого носоглотки и мокроты дает лучшие результаты по сравнению с исследованием отделяемого ротоглотки.
При обследовании пациента с клиническими признаками Influenza-ассоциированной инфекции верхних дыхательных путей следует выполнить анализ отделяемого носо/ротоглотки. При обследовании пациента с признаками Influenza-ассоциированной инфекции нижних дыхательных путей анализ мазков из зева и носа необходимо дополнить исследованием мокроты. Исследование мокроты также должно быть осуществлено при отрицательном результате, который дал анализ отделяемого верхних дыхательных путей у пациента с клиническими признаками гриппа. Следует повторить РТ-ПЦР при отрицательном результате исследования мокроты у пациента с клиническими признаками Influenza-ассоциированной инфекции нижних дыхательных путей.
Для более точной диагностики Influenza рекомендуется сочетание РТ-ПЦР с дополнительными общеклиническими исследованиями. Кроме того, необходимо исключить бактериальную суперинфекцию.
Для чего используется исследование?
- Для диагностики гриппа.
Когда назначается исследование?
При симптомах:
- острой респираторной вирусной инфекции (внезапное острое начало болезни, лихорадка, боль в горле, боль в мышцах, головная боль, светобоязнь, сухой кашель, боль в грудной клетке, одышка);
- острой энцефалопатии в период эпидемии гриппа (судороги, атаксия, нарушение сознания).
Что означают результаты?
Референсные значения: отрицательно.
Причины положительного результата:
- Influenza-ассоциированная инфекция.
Причины отрицательного результата:
- отсутствие Influenza-ассоциированной инфекции.
Важные замечания
- Положительный результат исследования не означает, что пациент остается заразным для окружающих.
- Анализ не позволяет выявлять Influenza серотипа С.
Также рекомендуется
- Клинический анализ крови: общий анализ, лейкоцитарная формула, СОЭ (с микроскопией мазка крови при выявлении патологических изменений)
- Mycoplasma pneumoniae, ДНК [реал-тайм ПЦР]
- Adenovirus, ДНК [реал-тайм ПЦР]
- Streptococcus pneumoniae, ДНК [реал-тайм ПЦР]
Кто назначает исследование?
Инфекционист, педиатр, врач общей практики, анестезиолог-реаниматолог.
Литература
- Kamps B. S, Hoffmann C, Preiser W. Influenza Report 2006 / B. S. Kamps, С. Hoffmann, W. Preiser W. — Flying Publisher, 2006.
- Wang R, Taubenberger JK. Methods for molecular surveillance of influenza. Expert Rev Anti Infect Ther. 2010 May;8(5):517-27.
- Schuchat A, Bell BP, Redd SC. The science behind preparing and responding to pandemic influenza: the lessons and limits of science. Clin Infect Dis. 2011 Jan 1;52 Suppl 1:S8-12.
- Pregliasco F, Mensi C, Camorali L, Anselmi G. Comparison of RT-PCR with other diagnostic assays for rapid detection of influenza viruses. J Med Virol. 1998 Oct;56(2):168-73.
- WHO Global Influenza Surveillance Network. Manual for the laboratory diagnosis and virological surveillance of influenza. — World Health Organization, 2011.
- Puccinotti, «Storia della medicina» (Ливорно, 1954—1959).
- Мустафин Р. И., Протасова А. А., Буховец А. В., Семина И.И. Исследование интерполимерных сочетаний на основе (мет)акрилатов в качестве перспективных носителей в поликомплексных системах для гастроретентивной доставки. Фармация. 2014; 5: 3–5.
- https://46cge.rospotrebnadzor.ru/content/%D0%BB%D0%B0%D0%B1%D0%BE%D1%80%D0%B0%D1%82%D0%BE%D1%80%D0%BD%D0%B0%D1%8F-%D0%B4%D0%B8%D0%B0%D0%B3%D0%BD%D0%BE%D1%81%D1%82%D0%B8%D0%BA%D0%B0-%D0%B3%D1%80%D0%B8%D0%BF%D0%BF%D0%B0-%D0%B8-%D0%BE%D1%80%D0%B2%D0%B8.
- https://www.garant.ru/products/ipo/prime/doc/71723602/.
- https://helix.ru/kb/item/09-120.
- Moustafine R. I., Bobyleva V. L., Bukhovets A. V., Garipova V. R.,Kabanova T. V., Kemenova V. A., Van den Mooter G. Structural transformations during swelling of polycomplex matrices based on countercharged (meth)acrylate copolymers (Eudragit® EPO/Eudragit® L 100-55). Journal of Pharmaceutical Sciences. 2011; 100:874–885. DOI:10.1002/jps.22320.
- Frédault, «Histoire de la médecine» (П., 1970).
- Ковнер, «Очерки истории M.».
