Вирус гриппа А/B, качественное определение РНК (Influenza virus A/B, quality, RNA)

Определение возбудителей острых респираторных вирусных инфекций человека (ОРВИ) в соскобе эпителиальных клеток ротоглотки и носоглотки

Метод определения Полимеразная цепная реакция с детекцией в режиме реального времени (Real- PCR).

Исследуемый материал Соскоб эпителиальных клеток рото- и носоглотки

Определение РНК/ДНК возбудителей острых респираторных вирусных инфекций в соскобе эпителиальных клеток ротоглотки и носоглотки методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с детекцией в режиме реального времени.

Острую респираторную вирусную инфекцию (ОРВИ), помимо вируса гриппа, чаще вызывают представители трех семейств РНК-содержащих вирусов: парамиксовирусы (респираторно-синцитиальный вирус, метапневмовирус человека, вирусы парагриппа 1-4), коронавирусы и пикорнавирусы (риновирусы) и двух семейств ДНК-содержащих вирусов: аденовирусы (виды B, C, E), парвовирусы (бокавирус человека).

Респираторно-синцитиальный вирус (РС-вирус) является основным возбудителем бронхиолитов и пневмоний у младенцев и детей младшего возраста во всем мире. В группу риска тяжелого течения PC-вирусной инфекции входят недоношенные младенцы, дети до двух лет, дети и взрослые с ослабленной вследствие заболеваний или лечения иммунной системой, пожилые люди (старше 65 лет).

Основными заболеваниями, развивающимися при инфицировании метапневмовирусами у детей, являются бронхиолиты, пневмония и бронхиальная астма. Вирусы парагриппа часто обнаруживаются у детей младшего возраста. Ко второму году жизни каждый ребенок хотя бы один раз переболевает ОРВИ, вызванной вирусами парагриппа. Вирусы парагриппа 2-го и 4-го типов чаще обнаруживают у детей первого года жизни, по сравнению с другими возрастными группами, где превалируют вирусы парагриппа 1-го и 3-го типов.

Аденовирусы подразделяют на семь видов: A, B, C, D, E, F, G. Аденовирусная инфекция вызывает острые заболевания, протекающие с умеренно выраженным интоксикационным синдромом и симптоматикой, зависящей от вида вируса: с поражением слизистых оболочек верхних дыхательных путей, лимфоидной ткани, глаз или кишечника. Известны случаи бессимптомного носительства аденовирусов, служащих источником возбудителя, в лимфоидной ткани верхних дыхательных путей на протяжении нескольких месяцев и лет.

У человека острую респираторную инфекцию вызывают четыре вида коронавирусов: 229E, OC43, NL63, HKUI. Заболевание чаще протекает с поражением верхних дыхательных путей легкой или средней степени тяжести, в редких случаях — с поражением нижних дыхательных путей. Кишечная разновидность инфекции встречается гораздо реже, в основном у детей. ОРВИ, вызванная коронавирусами, обычно длится в течение нескольких дней и заканчивается полным выздоровлением. Однако в ряде случаев заболевание может протекать в форме атипичной пневмонии или тяжелого острого респираторного синдрома (ТОРС). Эта патология характеризуется высокой летальностью, поскольку сопровождается острой дыхательной недостаточностью.

Самым распространенным возбудителем ОРВИ среди взрослого населения и детей всех возрастных групп являются риновирусы, вызывающие воспаление слизистой оболочки верхних дыхательных путей. Инфекция проявляется насморком и кашлем, нередко осложняется трахеитом.

В 2005 г. был описан бокавирус человека. Бокавирус обычно обнаруживается у младенцев и детей, нередко в сочетании с другими возбудителями ОРВИ. Бокавирусная инфекция проявляется лихорадкой, кашлем, насморком и диареей. У взрослых при тесном контакте с больными детьми бокавирус может вызывать легкие симптомы острого респираторного заболевания (ОРЗ), в редких случаях вирус обнаруживается при пневмонии, возникшей на фоне иммунодефицита.

Метод ПЦР обладает большей диагностической чувствительностью и специфичностью, по сравнению с другими методами выявления возбудителей ОРВИ (например, с иммунохроматографией и иммунофлуоресценцией).

Аналитические показатели:

определяемый фрагмент — специфический участок нуклеиновых кислот возбудителей острых респираторных вирусных инфекций человека (ОРВИ): РНК респираторно-синцитиального вируса (human Respiratory Syncytial virus, hRSv), метапневмовируса (human pneumovirus, hMpv), вирусов парагриппа 1, 2, 3 и 4-го типов (human Parainfluenza virus 1-4, hPiv), коронавирусов (human Coroirus, hCov), риновирусов (human Rhinovirus, hRv), ДНК аденовирусов групп B, C и E (human Adenovirus B, C, E, hAdv) и бокавируса (human Bocavirus, hBov);

специфичность обнаружения — отсутствие неспецифических реакций в отношении других вирусных и бактериальных возбудителей ОРЗ.

Аналитическая чувствительность

Аналитическая чувствительность выражается в геномных эквивалентах (ГЭ) возбудителя в 1 мл пробы:

• респираторно-синцитиальный вирус, метапневмовирус, риновирусы, бокавирус, вирусы парагриппа 1, 2, 3 и 4-го типов — 1х 10^3 ГЭ/мл;
• коронавирусы — 1х10^4 ГЭ/мл;
• аденовирусы — 5х10^3 ГЭ/мл.

1. Клинические рекомендации. Лабораторная диагностика гриппа и других ОРВИ методом полимеразной цепной реакции. — М. 2017:62.
2. Яцышина С.Б. Острые респираторные вирусные инфекции. Лабораторная диагностика инфекционных болезней. Справочник. Под ред. В.И. Покровского, М.Г. Твороговой, Г.А. Шипулина. — М.: Изд. «Бином». 2013:647.

Вирус гриппа А/B, качественное определение РНК (Influenza virus A/B, quality, RNA)

Метод определения Полимеразная цепная реакция с детекцией в режиме реального времени (Real- PCR).

Исследуемый материал Соскоб эпителиальных клеток рото- и носоглотки

Определение РНК вируса гриппа в соскобе эпителиальных клеток ротоглотки и носоглотки методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с детекцией в режиме реального времени.

Грипп — острая респираторная вирусная инфекция, передаваемая воздушно-капельным путем.

Возбудители гриппа — РНК-содержащие вирусы, относящиеся к семейству Orthomyxoviridae, в котором выделяют три рода: Influenza A virus, Influenza B virus, Influenza C virus.

Вирусы гриппа А и В ежегодно вызывают эпидемии большей или меньшей интенсивности практически во всех странах мира. Вирусы гриппа А широко распространены в природе, их выделяют у большинства зверей и птиц, в связи с чем они имеют высокий пандемический потенциал, так как способны преодолевать межвидовый барьер. Основной причиной возникновения эпидемий и пандемий гриппа является высокая вариабельность вируса вследствие изменений в его геноме. Это касается фрагментов, кодирующих поверхностные антигены вирусов типов А и В и определяющих их специфичность.

Вирусы Influenza А и B поражают преимущественно верхние отделы дыхательных путей: нос, горло, трахею и реже бронхи. Однако симптомы общей интоксикации при гриппе доминируют над умеренными катаральными проявлениями. Обычно заболевание сопровождается резким повышением температуры, мышечными и головной болями, сильным недомоганием, сухим кашлем, болью в горле и слизистыми выделениями из носа. Для гриппа, обусловленного новым или значительно измененным вирусом (например, для гриппа птиц типа А(H5N1) и А(H7N9), реже А (h2N1) pdm 2009), характерно острейшее, молниеносное начало, развитие различных вариантов токсикоза (нейротоксикоза, инфекционно-токсического шока в сочетании с гемодинамическими расстройствами) и III степени ДВС-синдрома (гемокоагуляционного шока).

Диагностика инфекции осуществляется комплексно, на основании анамнестических данных о контакте с больными гриппом и характерной клинической картины. Подтверждение диагноза возможно с помощью лабораторных исследований, что целесообразно при наличии клинических проявлений гриппа, в эпидемический сезон роста заболеваемости острыми респираторными инфекциями, при тяжелом течении респираторных болезней.

В качестве базовых тестов могут быть использованы следующие лабораторные исследования: определение антигенов вируса гриппа в мазках слизистой носа и ротоглотки методом непрямой иммунофлуоресценции или иммунохроматографии; определение антител к антигенам вируса гриппа А/B в сыворотке крови методом ИФА. Результаты ИФА, как правило, оцениваются ретроспективно. Вследствие поздней диагностики они не влияют на коррекцию терапии, но применимы в научных целях и для эпидемиологического надзора и контроля за гриппом. Наиболее современным методом лабораторной диагностики гриппа является выявление РНК вируса методом ПЦР.

Максимального уровня специфичности и чувствительности достигают тесты на основе ПЦР-ОТ (полимеразная цепная реакция с обратной транскрипцией) с гибридизационно-флуоресцентной детекцией продуктов амплификации в режиме реального времени, позволяющие обнаруживать в биологическом материале РНК возбудителя инфекции.

Аналитические показатели:

определяемый фрагмент — специфический участок нуклеиновой кислоты вирусов гриппа А (Influenza virus A) и гриппа В (Influenza virus B);

специфичность обнаружения — отсутствие неспецифических реакций в отношении других вирусных и бактериальных возбудителей ОРЗ.

Аналитическая чувствительность:

вирус гриппа А (Influenza virus A) — 1х10^3 ГЭ/мл пробы;

вирус гриппа В (Influenza virus В) — 1х10^3 ГЭ/мл пробы.

1. Грипп у взрослых. Клинические рекомендации. МЗ РФ. 2017:57. https://cr.rosminzdrav.ru/#!/schema/909
2. Грипп у детей. Клинические рекомендации. МЗ РФ. 2017:43. https://cr.rosminzdrav.ru/#!/schema/172
3. Грипп у взрослых: методические рекомендации по диагностике, лечению, специфической и неспецифической профилактике. Под ред. академика, профессора А.Г. Чучалина, главного внештатного инфекциониста СЗФО проф. Т.В. Сологуб. — СПб.: Издательско-полиграфический комплекс «НП-Принт». 2014:192.
4. Яцышина С.Б., Творогова М.Г., Шипулин Г.А., Малеев В.В. Лабораторная диагностика гриппа и других ОРВИ методом полимеразной цепной реакции. Лабораторная служба. 2017;6(3):238-267. https://doi: 10.17116/labs201763238-267.

Вирус гриппа А/B, качественное определение РНК (Influenza virus A/B, quality, RNA)

Метод определения Полимеразная цепная реакция с детекцией в режиме реального времени (Real- PCR).

Исследуемый материал Соскоб эпителиальных клеток рото- и носоглотки

Определение РНК вируса гриппа в соскобе эпителиальных клеток ротоглотки и носоглотки методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с детекцией в режиме реального времени.

Грипп — острая респираторная вирусная инфекция, передаваемая воздушно-капельным путем.

Возбудители гриппа — РНК-содержащие вирусы, относящиеся к семейству Orthomyxoviridae, в котором выделяют три рода: Influenza A virus, Influenza B virus, Influenza C virus.

Вирусы гриппа А и В ежегодно вызывают эпидемии большей или меньшей интенсивности практически во всех странах мира. Вирусы гриппа А широко распространены в природе, их выделяют у большинства зверей и птиц, в связи с чем они имеют высокий пандемический потенциал, так как способны преодолевать межвидовый барьер. Основной причиной возникновения эпидемий и пандемий гриппа является высокая вариабельность вируса вследствие изменений в его геноме. Это касается фрагментов, кодирующих поверхностные антигены вирусов типов А и В и определяющих их специфичность.

Вирусы Influenza А и B поражают преимущественно верхние отделы дыхательных путей: нос, горло, трахею и реже бронхи. Однако симптомы общей интоксикации при гриппе доминируют над умеренными катаральными проявлениями. Обычно заболевание сопровождается резким повышением температуры, мышечными и головной болями, сильным недомоганием, сухим кашлем, болью в горле и слизистыми выделениями из носа. Для гриппа, обусловленного новым или значительно измененным вирусом (например, для гриппа птиц типа А(H5N1) и А(H7N9), реже А (h2N1) pdm 2009), характерно острейшее, молниеносное начало, развитие различных вариантов токсикоза (нейротоксикоза, инфекционно-токсического шока в сочетании с гемодинамическими расстройствами) и III степени ДВС-синдрома (гемокоагуляционного шока).

Диагностика инфекции осуществляется комплексно, на основании анамнестических данных о контакте с больными гриппом и характерной клинической картины. Подтверждение диагноза возможно с помощью лабораторных исследований, что целесообразно при наличии клинических проявлений гриппа, в эпидемический сезон роста заболеваемости острыми респираторными инфекциями, при тяжелом течении респираторных болезней.

В качестве базовых тестов могут быть использованы следующие лабораторные исследования: определение антигенов вируса гриппа в мазках слизистой носа и ротоглотки методом непрямой иммунофлуоресценции или иммунохроматографии; определение антител к антигенам вируса гриппа А/B в сыворотке крови методом ИФА. Результаты ИФА, как правило, оцениваются ретроспективно. Вследствие поздней диагностики они не влияют на коррекцию терапии, но применимы в научных целях и для эпидемиологического надзора и контроля за гриппом. Наиболее современным методом лабораторной диагностики гриппа является выявление РНК вируса методом ПЦР.

Максимального уровня специфичности и чувствительности достигают тесты на основе ПЦР-ОТ (полимеразная цепная реакция с обратной транскрипцией) с гибридизационно-флуоресцентной детекцией продуктов амплификации в режиме реального времени, позволяющие обнаруживать в биологическом материале РНК возбудителя инфекции.

Аналитические показатели:

определяемый фрагмент — специфический участок нуклеиновой кислоты вирусов гриппа А (Influenza virus A) и гриппа В (Influenza virus B);

специфичность обнаружения — отсутствие неспецифических реакций в отношении других вирусных и бактериальных возбудителей ОРЗ.

Аналитическая чувствительность:

вирус гриппа А (Influenza virus A) — 1х10^3 ГЭ/мл пробы;

вирус гриппа В (Influenza virus В) — 1х10^3 ГЭ/мл пробы.

1. Грипп у взрослых. Клинические рекомендации. МЗ РФ. 2017:57. https://cr.rosminzdrav.ru/#!/schema/909
2. Грипп у детей. Клинические рекомендации. МЗ РФ. 2017:43. https://cr.rosminzdrav.ru/#!/schema/172
3. Грипп у взрослых: методические рекомендации по диагностике, лечению, специфической и неспецифической профилактике. Под ред. академика, профессора А.Г. Чучалина, главного внештатного инфекциониста СЗФО проф. Т.В. Сологуб. — СПб.: Издательско-полиграфический комплекс «НП-Принт». 2014:192.
4. Яцышина С.Б., Творогова М.Г., Шипулин Г.А., Малеев В.В. Лабораторная диагностика гриппа и других ОРВИ методом полимеразной цепной реакции. Лабораторная служба. 2017;6(3):238-267. https://doi: 10.17116/labs201763238-267.